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高通量組織研磨儀分析南瓜雜交種純度

來源： http://www.siela.cn/ 　類別：技術(shù)文章　更新時(shí)間：2015-07-22　閱讀次

　　在水稻、玉米、大豆、油菜等重要農(nóng)作物上,SSR標(biāo)記技術(shù)已成為一種普遍采用的純度鑒定方法。SSR標(biāo)記由于具有數(shù)量豐富，多態(tài)性高，共顯性遺傳，操作簡(jiǎn)便，結(jié)果穩(wěn)定可靠等優(yōu)點(diǎn),已成為當(dāng)今作物品種純度鑒定的理想標(biāo)記類型。且快速簡(jiǎn)便SSR檢測(cè)方法也被研究建立起來，"南瓜SSR標(biāo)記開發(fā)較遲,目前主要用于遺傳連鎖圖譜的構(gòu)建，基因定位等基礎(chǔ)研究方面,而在應(yīng)用研究上較少。高通量組織研磨儀可以在研究制樣品種發(fā)揮重要的作用。
　　
　　將種子浸種lh后,置于墊有濾紙的發(fā)芽盒,37e,并注意保濕"發(fā)芽5一6天左右,取單粒發(fā)芽種子的胚軸約.05cm,放到.20mL離心管中,高通量組織研磨儀研碎;加入600林LCATB提取液,65e水浴10mni;加入等體積氯仿:異戊醇(24:1),充分倒置混勻約10min,于120001丫11〕in離心10min;取上清液,加等體積預(yù)冷的異丙醇混勻(輕輕倒轉(zhuǎn)),于常溫下放置約30min,1200Or力1〕in離心10min;棄上清液,倒置使其自然風(fēng)干或置于超凈工作臺(tái)讓其吹干,加入適量ddHZO溶解備用"
　　
　　通過高通量組織研磨儀的參與研究，簡(jiǎn)便SSR檢測(cè)體系比常規(guī)SSR檢測(cè)體系更簡(jiǎn)單實(shí)用,但也存在提取的基因組DNA量較少!不易于長(zhǎng)時(shí)間保存的缺點(diǎn)"此外,雖然本研究所用的檢測(cè)體系相對(duì)于常規(guī)檢測(cè)體系大大減少了試劑用量,但理論上,在保障點(diǎn)樣量的前提下,還可將PCR反應(yīng)體系進(jìn)一步減小;為提高檢測(cè)效率,還可探索采用多重PCR,以便同時(shí)檢測(cè)多個(gè)位點(diǎn)的差異,因此,擴(kuò)增體系還可進(jìn)一步優(yōu)化"在電泳檢測(cè)時(shí),本研究?jī)H點(diǎn)樣1次,對(duì)于合適引物的擴(kuò)增產(chǎn)物,可以探索點(diǎn)樣2次甚至多次,以便節(jié)約制膠成本,這方面的工作尚需根據(jù)擴(kuò)增產(chǎn)物大小進(jìn)一步摸索。

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